Análisis de flavivirus y alfavirus presentes en larvas de Aedes aegypti colectadas en el Estado de Morelos

Abstract

"Resumen Las enfermedades infecciosas emergentes, tales como las causadas por arbovirus, son un problema de salud pública en el mundo. Los virus de Zika (ZIKV), Dengue (DENV) y Chikungunya (CHIKV) pertenecen a los virus transmitidos por artrópodos hematófagos, o arbovirus, siendo Aedes aegypti su principal vector. La información acerca de la dinámica viral en el vector es limitada, sin mencionar que se desconoce el papel de la transmisión vertical en la dinámica y epidemiología de estos virus, por lo que nuestro objetivo fue la detección y aislamiento de estos tres virus en larvas de Ae. aegypti a fin de obtener información acerca de la transmisión vertical. Se colectaron huevos de mosquito en Jojutla, Morelos, usando ovitrampas colocadas en casas o casas cercanas a casos registrados de DENV, ZIKV o CHIKV. La colección de huevos y la eclosión y crecimiento de larvas fueron realizados de acuerdo a los protocolos del Centro Nacional de Programas Preventivos y Control de Enfermedades. Las larvas eclosionaron bajo condiciones controladas y éstas se separaron en pools para posteriormente realizar la extracción de RNA. La detección viral fue realizada mediante RT-PCR y RT-qPCR para DENV, ZIKV y CHIKV. Los resultados muestran que existe la transmisión vertical de DENV, ZIKV y CHIKV en Aedes aegypti silvestres. En este estudio encontramos un total de 45 pools positivos para DENV, 17 para ZIKV y 7 para CHIKV de 162 analizados. De estos se pudieron aislar virus de DENV a partir de 2 pools, ZIKV a partir de 4 y CHIKV a partir de 2. Se logró ensamblar el genoma completo de uno de los aislados de ZIKV a partir de las secuencias obtenidas a través de Secuenciación de Siguiente Generación, reportando así el primer genoma ensamblado de ZIKV aislado de larvas. Abstract Emerging infectious diseases, such as the ones caused by arboviruses, are an important health issue worldwide. Zika (ZIKV), dengue (DENV) and chikungunya (CHIKV) belong to the group of viruses transmitted through the bite of hematophagous arthropods, or arboviruses, being Aedes aegypti their main vector. Information about the viral dynamics in their vectors is limited; notably the role of vertical transmission in the dynamics and epidemiology of these viruses needs to be established, therefore our aim was to detect and isolate these viruses in Ae. aegypti larvae in order to obtained more information about vertical transmission. Mosquito eggs were collected in Jojutla, Morelos using ovi-traps that were placed inside houses or nearby houses with registered cases of zika, dengue or chikungunya. The collection of eggs and breeding of larvae were done according to the National Center of Preventive Programs and Disease Control protocols. Eggs were grown under controlled conditions to obtain the larva stage up to the second or the third state. Larvae were pooled and then used to obtain RNA extracts that were tested by RT-PCR and RT-qPCR for ZIKV, DENV and CHIKV. The results showed natural vertical transmission of ZIKV, DENV and CHIKV in wild Aedes aegypti, we found 45 positive pools for DENV, 17 from ZIKV and 7 for CHIKV out of 162 pools examined. Of these positive pools we isolated DENV out of 2 pools, ZIKV out of 4 pools and CHIKV out of 2 pools. In order to confirm viral isolation we amplified fragments of the genome of these viruses. We obtained the complete genome of ZIKV through Next Generation Sequencing, being the first complete genome isolated from larvae. Our results are evidence of the vertical transmission of DENV, ZIKV and CHIKV in mosquito populations from Morelos; these results would help us understand how viruses can remain in the wild between outbreaks and the importance of vertical transmission in the ecology of the arbovirus".