Caracterización de un posible inhibidor de TveIF-5A de Trichomona vaginalis.

Abstract

"Trichomonas vaginalis es el agente causal de la tricomonosis infección de transmisión sexual que afecta el tracto urogenital. Este parásito depende del hospedero para obtener los nutrientes necesarios para su sobrevivencia, como son las poliaminas. Estos cationes participan en la regulación de propiedades de virulencia como: la adhesión y citotoxicidad. Una proteína dependiente de poliamina es eIF-5A. En T. vaginalis se describieron dos genes tveif-5a que codifican para una proteína de 19 kDa, la cual es altamente conservada. Mediante 2D-Western blot utilizando anticuerpos anti-peptido especifico anti-TveIF-5A se inmunodetectaron dos manchas con puntos isoeléctricos (pI) de 5.2 y 5.5 de 19 y 20 kDa respectivamente, lo que sugiere la presencia de la TveIF-5A precursora y activa. Para confirmar la identidad de estas proteína se realizó un análisis de espectrometría de masas (ESI MS-MS), de manera interesante en ambas manchas se identificó un posible inhibidor de la traducción que presenta un peso molecular de 13.4 kDa, el cual podría estar regulando la expresión de TveIF-5A, de manera natural en el organismo. Nuestros resultados muestran que el genoma de T. vaginalis presentó tres marcos de lectura abierta (ORF) de genes que codifican para un posible inhibidor de la traducción. El gen localizado en el locus TVAG_035410, codifica para el inhibidor de TveIF-5A al cual denominamos IhTveIF-5A. Este inhibidor presenta una estructura tipo barril conformada por dos α-helices y cinco hojas β plegadas, tiene un dominio endoribonucleasa y posiblemente pertenezca a la familia YER057c/YjgF o L-PSP. Esta familia de proteínas está muy conservada; sin embargo su función aún se desconoce. Mediante ensayos de RT-PCR de parásitos crecidos en presencia y ausencia de poliaminas utilizando un inhibidor de la síntesis de poliaminas 1,4 Diamino-2-butatona dihidroclorido (DAB), se observo la expresión del gen IhTveIF-5A, se regula negativamente por poliaminas; debido a que en medio con DAB su expresión se mantiene en condiciones normales. Sin embargo cuando de agrega putrescina exógena al medio se observa una disminución de su expresión ~60%. Sugiriendo una regulación mediada por la vía de poliaminas en T. vaginalis. Esta proteína al parecer interacciona con TveIF-5A., por lo que se propone participe en un mecanismo post-transcripcional mediado por poliaminas a través de las secuencias tipo EREs de los RNAm de T. vaginalis".